氮末端 B 型利钠肽原（NT-proBNP）溶液标准物质可为 NT-proBNP 临床诊断试剂、相关产品研发过程中的分析方法评价、实验室质量控制、质控品中 NT-proBNP 含量的测定提供标准，保证其测量结果的准确性与溯源性。

一、 样品制备

本标准物质的原料由原核细胞表达获得，在恒温、恒湿、洁净的实验室环境中（温度 22℃，相对湿度 21%）使用 200mM 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）溶解、混匀后分装；外包装为含外旋盖的高密度聚乙烯冻存管。

二、 溯源性及定值方法

标准物质定值采用了基于氨基酸水解同位素稀释质谱法（AA-IDMS）和基于酶解肽段同位素稀释质谱法（Pep-IDMS）两种不同原理的测量方法。在 AA-IDMS 中，采用高效液相色谱-光电二极管阵列检测器（HPLC-PDA）对主成分及结构类似物进行纯度分析，采用超高液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-ToF）对主成分及结构类似物进行氨基酸序列鉴定，采用高效液相色谱-三重四极杆质谱（HPLC-QqQ）对 NT-proBNP 盐酸水解后释放的四种氨基酸（亮氨酸、缬氨酸、精氨酸、异亮氨酸）进行 IDMS 定量；在 Pep-IDMS 中，首先选择 NT-proBNP 酶解产物（金黄色葡萄球菌 V8蛋白酶）中的两条肽段作为定量肽并进行固相合成，采用 HPLC-PDA 对两条合成后的定量肽主成分及结构类似物进行纯度分析，采用 UPLC-Q-ToF 对两条定量肽主成分及结构类似物进行氨基酸序列鉴定，采用 HPLC-QqQ 对合成定量肽水解释放的氨基酸（定量肽 1 使用精氨酸、亮氨酸，定量肽 2使用精氨酸、缬氨酸）进行 AA-IDMS 定量，随后根据结构类似肽分析结果对定量肽纯度进行校准，随后将其用于 Pep-IDMS 法定量 NT-proBNP 的研究中。定值过程中所有氨基酸均为国家一级纯度标

准物质，可溯源至 SI 单位。F 检验结果表明两种定值方法具有等精度，但 t 检验未通过，最终将两种方法的定值结果平均值作为 NT-proBNP 溶液标准物质的特性量值。

三、 特性量值及不确定度

编号	名称	标准值(μg/g)	不确定度(μg/g)
GBW(E)091242	氮末端B型利钠肽原（NT-proBNP）溶液标准物质	78.5	5.1

四、 均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用氨基酸水解同位素稀释质谱法，按照随机抽样原则对标准物质进行均匀性评估。评估结果表明，样品均匀性良好; 采用氨基酸水解同位素稀释质谱法，对样品进行稳定性评估，评估结果表明，样品稳定性良好。

本标准物质密度为 1.04mg/mL，最小取样量为 100mg（≥96.2mL），只有在遵循最小取样量的前提下，标准物质的特性值及其不确定度才是有效的。本标准物质自定值日期起有效期 18 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、 包装、贮存及使用

1. 包装：本标准物质保存于 0.5mL 含外旋盖的高密度聚乙烯冻存管中，每管不少于 200mL。

2. 贮存及使用：置于（-80 ~ -70）℃超低温冰箱中贮存。采用干冰运输，收到标准物质后应检查标准物质是否处于冰冻状态，检查无误方可使用；建议室温平衡 1 小时后按实际使用需求分装，7天内使用条件下可置于-20℃冰箱短暂保存，避免反复冻融。

3. 使用注意事项：本标准物质与天然 NT-proBNP 氨基酸序列相比，在氨基端多出 1 个甲硫氨酸（Methionine，Met），其余结构与天然序列一致，由 77 个氨基酸组成。