国家药品标准物质使用说明书
肠道病毒 71 型人免疫球蛋白国家标准品
1. EV71 人免疫球蛋白国家标准品（The standard）
首批 EV71 人免疫球蛋白国家标准品批号为 280021-201001。每 支安瓶分装量为 0.5ml，冻干品。该批国家标准品经国家药品监督管 理总局（SFDA）批准，获得批准文号（2013）国生标字 0028。
2. 效价 ( Biological activity )
第一批 EV71 人免疫球蛋白国家标准品有 5 个单位参加协作标 定，包括中国食品药品检定研究院、同路生物制药股份有限公司、中 国疾病与控制中心病毒病预防与控制所、成都蓉生药业有限责任公 司、江西博雅生物制药股份有限公司。标定方法为微量细胞病变法。 所有的标定实验均采取统一的 SOP、相同的 EV71病毒毒株进行标定； 本次协作标定毒株为中国疾病控制中心病毒病研究所提供的经过测 序验证的 C4 亚型病毒，FY04-R5-C1。根据细胞病变程度，用 Karber 法计算 50%样品中和终点。50%细胞不产生 CPE 的样品稀释度为其中 和抗体滴度。以中和抗体滴度的倒数表示待测标准品的中和效价，单 位标示为（unit ,U）。汇总计算 5 家实验室协作标定结果其平均几何 中和滴度为 1：333，为计算方便，定义该批次标准品的中和效价为 330U。
3.原料和分装（Bulk material and filling）
制备该标准品的原料来自于国内5家企业生产的 7批静注人免疫 球蛋白（pH4)产品、3 批静注 EV71 免疫球蛋白（pH4) 产品共 54 瓶，总体积为 2390ml。全部批次产品均经过批签发检验合格或注册检验 全检合格。委托兰州生物制品研究所有限责任公司将全部原料合并、 除菌分装、冻干。分装量：0.5ml/支；分装误差（RSD%）为 0.56%； 生产日期：2010.10.25。
该标准品外观为白色粉末，水分含量为 0.6%，无菌试验、HBsAg、 Anti-HCV 和 Anti-HIV 均为阴性。
4. 储存条件和使用说明(Storage and reconstitution)
建议-20℃以下保存。使用时首先平衡到室温后，准确加入0.5ml/ 支灭菌注射用水复溶，约 0.5 分钟溶解后轻轻摇匀。溶解后的标准品 需马上使用。使用时应根据需要进行稀释。如果一次使用不完应废弃 该标准品。不可反复冻溶重复使用。
使用时按照微量细胞病变法的原理，在细胞培养板孔内分别将 100 CCID50/0.05ml 的 EV71 病毒与连续倍比稀释的 EV71 人免疫球 蛋白国家标准品、待检样品等比例混合，37℃孵育 2h 充分中和后， 把敏感的 RD 细胞分别接种于细胞板微孔，36℃~37℃ 、5%CO2 连续 培养7天，第5-7天观察不同稀释度的样品保护细胞感染病毒的情况。 根据细胞病变程度按 Karber 法计算 50%样品的中和终点。
50%细胞不产生 CPE 的样品稀释度的倒数标示为其中和效价。并 用标准品对结果进行效价的校正，其公式为：
待测检品的校正效价= （待测检品实测中和效价×标准品的标示效价 （330U））/ 标准品实测中和效价。
5. 注意事项 (Caution)
5.1 试验应按照 Karber 法计算中和终点，即能够保护 50％细胞不 受 100CCID50 攻击病毒感染的样品最高稀释度。也可以称为该样品的 中和抗体滴度，通常以倒数表示，例如 1:512 等。样品的效价规定为 中和抗体滴度的倒数。
待测样品中和抗体效价计算公式为:
Log 待测标准品中和抗体滴度 = Xm + 0.5d ?C d ∑pi
Xm=供试品最高浓度稀释度的对数
d=稀释度系数(倍数)的对数
∑pi=每个稀释度未发生病变率的总和
待样品的中和抗体效价=1/待测标准品中和抗体滴度
5.2 病毒回滴试验应在 32~320CCID50 之间，否则试验无效。试验一 般采用 12 孔平行法。
5.3 由于该标准品用人免疫球蛋白制备而成，虽然 HBsAg、Anti-HCV 和 Anti-HIV 检测均为阴性，但不排除有传染某些病毒性疾病的潜在 危险，所以使用和废弃该标准品时，应按实验室安全操作细则进行， 包括穿工作服、带防护手套、避免气溶胶产生等措施。在打开瓶口时， 应小心打开避免破碎。
【有效期】国家药品标准物质不设具体有效期，按照规定条件保存的标准物质，在中检院发布停用通知前有效。
声明：
1.请按本品说明书规定使用，若作他用，用户须自行证明适用性;
2.因用户使用或储存不当所引起的损害或投诉，用户自行承担相关责任;
3.用户收到本品后应立即核对品种、数量、包装等，若出现质量、数 量等不符，相关赔偿只限于标准物质本身，不涉及其他任何损失。