枯草芽孢杆菌是一种广泛分布于各种环境中的革兰氏阳性杆状好养型细菌，由于其易培养、易保存、无毒无害、耐受性强和不产生环境污染等优点，被作为理想生物指示菌。枯草芽孢杆菌芽孢计数标准物质主要用于生物安全柜人员、产品和交叉污染保护性能评价，也可用于空气微生物采样器和浮游菌采样器采集效率以及消毒灭菌效果评价，为评价结果的可靠性提供计量溯源保障。

一、 样品制备

选取枯草芽孢杆菌黑色变种（Bacillus subtilis var. niger）标准菌株（菌株编号：ATCC9372），培养诱导产生芽孢，用移液器将芽孢悬液分装至 100 mL 西林瓶，冻干后充氮气压盖密封。

二、 溯源性及定值方法

本标准物质由多家单位采用枯草芽孢杆菌涂布平板法（见附件 A）进行合作定值。通过对标准物质进行 10 倍系列稀释后，对可进行计数的培养基平板上的每个芽孢生长的单个菌落数量进行计数，采用公式计算得到芽孢浓度，其量值单位为 CFU/mL（CFU，菌落形成单位 Colony-Forming Units）。通过使用满足计量学特性要求、经确认的定量测量方法和经检定校准的质量、容量等计量器具，确保本标准物质的量值溯源至实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。

三、 特性量值及不确定度 

所赋特性量值的不确定度由定值方法、天平、移液器、稀释因子、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。

四、 均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用枯草芽孢杆菌涂布平板法，按照随机抽样原则对样品进行均匀性评估，方差分析结果表明，样品均匀性良好；采用相同测量方法，按照先密后疏的原则对样品进行稳定性评估，趋势分析结果表明，4℃下可以长期稳定保存，37℃下可以稳定保存 14 天，因此，标准物质应贮存在 4 ℃，建议冰袋运输，运输时限不超过 4 天。

该标准物质自定值之日起，有效期为 36 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、 包装、贮存及使用

1.包装与保存：本标准物质采用 100 mL 西林瓶包装，冻干后充氮气压盖密封。采用冰袋运输，收到后请于 4 ℃箱中保存。

2.使用：本标准物质开瓶后应当一次性完全使用。使用前自冰箱取出并自然平衡至室温，用天平精确称量（59.9±0.1）g（20 ℃无菌蒸馏水复溶冻干的标准物质。用户可参考附件 A 枯草芽孢杆菌芽孢计数标准物质测量方法，使用胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基进行测试。

3.本标准物质含有微生物，使用前应佩戴口罩和乳胶手套；使用时应注意防护，避免吸入或与皮肤接触；使用后的剩余样品、包装瓶及取样吸头等消耗品应按生物污染废弃物进行高压灭菌处置。