大肠杆菌是生长在人和动物肠道中非常重要的一种细菌，在水和食品中检出大肠杆菌，可认为是被粪便污染的指标。大肠杆菌数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。因此，几乎所有的食品卫生微生物检验标准中都会采用大肠杆菌计数限量指标作为重要的卫生指标。该标准物质可以用于奶粉中大肠杆菌定量检测和微生物实验室测量质量控制等，保证微生物检测数据的准确和可靠。

一、样品制备

选取大肠杆菌（Escherichia coli）标准菌株（菌株编号 CICC10389），培养收获菌液。将一定浓度的菌液与保护剂混匀，用移液器分装至西林瓶进行冻干，随后添加奶粉并压盖密封。

二、溯源性及定值方法

本标准物质由多家实验室采用大肠杆菌倾注平板法（见附件 A）进行合作定值。通过将标准物质进行 10 倍系列稀释后，对可进行计数的培养基平板上的菌落数量进行计数，采用公式计算得到大肠杆菌数量，其量值单位为 CFU/g（CFU，菌落形成单位 Colony-Forming Units）。通过使用满足计量学特性要求、经确认的定量测量方法和经检定校准的质量、容量等计量器具，确保本标准物质的量值溯源至实体数基本单位“一”（符号：1）以及质量的 SI 基本单位“千克”（kg）。

三、特性量值及不确定度

所赋特性量值的不确定度由定值方法、天平、移液器、稀释因子、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。

四、均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用大肠杆菌倾注平板法，按照随机抽样原则对样品进行均匀性评估，方差分析结果表明，样品均匀性良好；采用相同测量方法，按照先密后疏的原则对样品进行稳定性评估，趋势分析结果表明，-20℃下可以长期稳定保存，4℃下可以稳定保存 14 天，因此，标准物质应贮存在-20℃下，建议干冰运输。

该标准物质自定值之日起，有效期为 6 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、包装、贮存及使用

1.包装与贮存：本标准物质采用 8 mL 棕色西林瓶包装，每瓶 0.5 g。采用干冰运输，收到后应检查标准物质是否处于干冰冷藏状态。检查无误后置于-20℃冰箱中保存。

2.使用：本标准物质开瓶后应当一次性完全使用。使用前从-20℃取出并平衡至室温（20℃），用天平精确称量（4.49±0.01）g 无菌蒸馏水复溶冻干的标准物质。用户可参考附件 A 奶粉中大肠杆菌标准物质测量方法，使用结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）培养基和结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂（VRBA-MUG）培养基进行测试。

3.本标准物质含有微生物，使用前应佩戴口罩和乳胶手套；使用时应注意防护，避免吸入或与皮肤接触；使用后的剩余样品、包装瓶及取样吸头等消耗品应按生物污染废弃物进行高压灭菌处置。