大肠菌群是生长在人和动物肠道中非常重要的一类细菌，在水和食品中检出大肠菌群，可认为是被粪便污染的指标。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。几乎所有的食品卫生微生物检验标准中都会采用大肠菌群限量指标作为重要的卫生指标。本标准物质在微生物实验室能力验证、微生物测量方法评价和微生物培养基生长率的评价等方面有广泛的用途，为食品安全、微生物检测领域提供计量溯源保障。

一、 样品制备

选取大肠杆菌（Escherichia coli，菌株编号 CICC 10389）、弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii，菌株编号 CICC 10404）、阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae，菌株编号 ATCC 13047）和产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes，菌株编号 CICC 10293）作为原材料。分别培养后进行混合，然后用移液器分装至棕色西林瓶，添加米粉并冻干后压盖密封。

二、 溯源性及定值方法

本标准物质由多家单位采用倾注平板法（见附件 A）进行合作定值。通过对标准物质进行 10 倍系列稀释后，对可进行计数的培养基平板上的菌落数量进行计数，采用公式计算得到大肠菌群数量，其量值单位为 CFU/g（CFU，菌落形成单位 Colony-Forming Units）。通过使用满足计量学特性要求、经确认的定量测量方法和经检定校准的质量、容量等计量器具，确保本标准物质的量值溯源至实体数基本单位“一”（符号：1）以及国家法定计量单位克（g）。

三、 特性量值及不确定度

所赋特性量值的不确定度由定值方法、天平、移液器、稀释因子、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。

四、 均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用大肠菌群倾注平板法，按照随机抽样原则对样品进行均匀性评估，方差分析结果表明，样品均匀性良好；采用相同测量方法，按照先密后疏的原则对样品进行稳定性评估，趋势分析结果表明，-20℃下可以长期稳定保存，4℃下可以稳定保存 7 天。

该标准物质自定值之日起，有效期为 6 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、 包装、贮存及使用

1.包装与保存：本标准物质采用棕色西林瓶包装，每瓶 0.5 g，计算时按照 0.5 g 计算。采用干冰运输，收到后请于-20℃冰箱中保存。

2.使用：本标准物质开瓶后应当一次性完全使用前从-20℃取出并在室温（20℃）下平衡 10 分钟，用天平精确称量（4.4919±0.0100）g 无菌蒸馏水复溶冻干的标准物质。用户可参考附件 A 米粉中大肠菌群计数标准物质测量方法，使用结晶紫中性红胆盐琼脂琼脂（VRBA）培养基进行测试。

3.本标准物质含有微生物，使用前应佩戴口罩和乳胶手套；使用时应注意防护，避免吸入或与皮肤接触；使用后的剩余样品、包装瓶及取样吸头等消耗品应按生物污染废弃物进行高压灭菌处置。

六、 参考文献

[1] GB 4789.3-2016, 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数[S].