新型冠状病毒（2019-nCoV）全序列假病毒 RNA 标准物质可作为测量标准，参与从采样、核酸提取、扩增检测的全过程，用于新型冠状病毒核酸定性和定量测量、方法验证评价以及实验室质量控制。
一、样品制备
本标准物质是通过将新冠病毒全部序列分段合成质粒，然后通过转染进入细胞得到假病毒颗粒，经过纯化后混合稀释至一定浓度分装。
二、溯源性及定值方法
采用绝对定量方法-数字 PCR 方法对 N、S、E 和 ORF1ab 基因进行拷贝数浓度测定，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。
三、特性量值及不确定度
|
名称
|
编号
|
基因名称
|
标准值（copies/μL）
|
扩展不确定度（k=2）(copies/μL)
|
|
新型冠状病毒（2019-nCoV）全序列假病毒RNA标准物质（新冠病毒相关）
|
GBW09300
|
ORF1ab (No. NC_045512：13025-18039)
|
125
|
58
|
|
ORF1ab (No. NC_045512：18040-21552)
|
172
|
69
|
|
S (No. NC_045512：21563-25384) *
|
（184）
|
（70）
|
|
E (No. NC_045512：25393-29674)
|
84
|
35
|
|
N (No. NC_045512：25393-29674)
|
86
|
36
|
*S 基因的拷贝数浓度为信息值。
所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性、稳定性、修正提取效率和逆转录效率引入的不确定度分量合成得到。
四、均匀性和稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验，结果表明均匀性良好，最小取样量为 5 μL。采用数字 PCR 方法对该标准物质进行了初步稳定性考察，参考同类标准物质的稳定性数据，自定值日期起，有效期暂定为 12 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、储存及使用
1.包装规格：本标准物质采用 0.5mL 带内盖彩色冻存管包装，每管 200μL。
2.保存及运输条件：置于-70℃冰箱中保存。采用干冰运输，收到标准物质后应检查标准物质是否处于冰冻状态。检查无误才可用于实验。
3.本标准物质相关实验操作，须在生物安全（BSL）二级及以上实验室，佩戴乳胶手套和防护口罩，在生物安全柜中进行。
4.本标准物质开瓶后一次性使用，不可反复冻融。使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温混匀。
5.若作为质控物质监测采样、提取和扩增过程，可将本标准物质全部转移至采样管中，与待测样本进行相同处理。
6.本标准物质为假病毒形式，使用时应先进行核酸提取，推荐使用 Qiagen52904/52906 病毒 RNA提取试剂盒提取。
7.本标准物质包含了新冠病毒的全长序列，由于 ORF1ab 基因较长，分布在不同区段，请仔细核实使用的 PCR 引物序列所对应的病毒基因组坐标，确保标准物质的量值与其对应。
8.对提取后的 RNA 进行梯度稀释时，推荐使用 RNA 保存液进行稀释。
9.使用后的标准物质包装瓶以及移液器吸头等实验材料应在丢弃前进行高压灭菌。
10.标准物质使用过程中如操作不当可能会导致实验室环境阳性。