5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因 （MTHFR）C677T 突变基因组 DNA 标准物质可作为测量标准，用于实时荧光定量 PCR、数字 PCR 和高通量测序等方法定性、定量测定 MTHFR 基因突变，还可用于 MTHFR 检测方法的验证和实验室质量控制等领域。
一、样品制备
本标准物质是通过 CRISPR/Cas9 构建突变细胞株，并提取纯化突变细胞的基因组 DNA，稀释至一定浓度分装制备而成。
二、溯源性及定值方法
采用绝对定量方法-数字 PCR 方法对 MTHFR C677T 野生型、突变型基因拷贝数浓度测定，计算野生或突变型基因占野生与突变基因之和的百分比，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。
三、特性量值及不确定度
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编号
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名称
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基因突变丰度标准值（%）
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基因突变丰度扩展不确定度（k=2）（%）
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信息值
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野生型基因拷贝数浓度(×104copies/μL)
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突变型基因拷贝数浓度(×104copies/μL)
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NIM-RM4613
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5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因（MTHFR）C677T突变基因组DNA标准物质
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35.8
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4.6
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2.71
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1.51
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所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性以及稳定性引入的不确定度分量合成得到。
四、均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验，最小取样量为 10 μL，结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采用数字 PCR 方法对该标准物质进行稳定性考察研究，标准值无方向性变化并通过平均值一致性检验，表明稳定性良好。
本标准物质定值日期起，有效期为 2 年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1.包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 冻存管包装，每管 100 μL。
2.保存和运输条件：置于-40°C 冰箱中保存，采用冰袋运输。
3.使用注意事项：使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温后混匀使用，不建议反复冻融使用。
4.本标准物质的用途是对高通量测序、PCR 等序列特异性方法进行确认或验证，以及实验室质量控制。