噬菌体ΦX174 在形态、结构和大小上与人类和动物细胞病毒极为相似，但其具有严格的宿主特异性，仅以细菌作为寄主，不会造成试验人员感染，试验程序上的简便性、操作性和安全性都较强。目前，ISO16604 等标准中指定使用噬菌体ΦX174 作指示病毒用于生物防护性能评价。噬菌体ΦX174 经冻干制备成的标准物质量值稳定、使用方便，满足了人员防护装备防护性能评价中的生物检测指示病毒的量值传递要求，保障了评价结果的准确和可靠。在生物安全、公共卫生保障技术和体系方面发挥了强有力的技术保障作用，对促进经济社会发展和保障大众健康具有重要战略意义[1]。

一、 样品制备

取冻存的宿主菌 E.coli 13706，在营养琼脂平板上划线复活，从营养琼脂平板上挑取单一的菌落接种到营养肉汤，37℃培养直到营养肉汤变浑浊，接种噬菌体ΦX174（ATCC 13706B1）储存液，37℃培养直至培养物变清澈，加入氯仿后再 37℃水浴中恒温震荡培养 10 min，即得到噬菌体ΦX174匀液。制备一定浓度的噬菌体ΦX174 匀液，与中国计量科学研究院研制的噬菌体ΦX174 冻干保护剂混合均匀后，用移液器分装 1 mL 至棕色西林瓶中，将分装好的噬菌体ΦX174 匀液与隔板在-80℃冰箱中预冻 4 h 以上后，在冷冻干燥机上选择隔板最终温度 20℃，0.370 mbar 进行冷冻干燥 36-48 h。冻干完成后，充氮气压盖密封。将制备好的噬菌体ΦX174 标准物质贮存在-20℃冰箱。

二、 溯源性及定值方法

本标准物质的定值方法是噬斑计数法，该方法采用国际标准组织发布的参考测量程序，是通过对标准物质进行 10 倍系列稀释后，对可进行计数的培养基平板上的每个活噬菌体生长的噬斑数量进行计数，采用公式计算得到活噬菌体浓度，其量值单位是 PFU/mL（PFU，噬斑形成单位 Plaque Forming Units），因此该方法是绝对定量测量方法。本标准物质经多家单位采用噬斑计数法的定值结果为标准值，通过采用国际标准组织发布的参考测量程序和使用满足计量学特性要求的计量器具，保证标准物质量值的溯源性。

三、 特性量值及不确定度

不确定度的评定中考虑了定值方法、移液器、稀释因子及均匀性和稳定性引入的不确定度分量。

四、 均匀性及稳定性评估

参照 JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》，采用噬斑计数法对该标准物质进行均匀性检验研究和稳定性考察研究，结果表明均匀性和稳定性均良好。趋势分析结果表明，-20℃下可以长期稳定保存，4℃下可以稳定保存 7 天，因此，标准物质应贮存在-20℃下；建议干冰运输，运输时限不超过 4 天。

该标准物质自定值之日起，有效期为 6 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。

五、 包装、贮存及使用

1. 包装与储存：本标准物质采用棕色西林瓶包装；置于-20℃温度下冷冻保存。该标准物质有效期是 6 个月。

2. 使用：使用时考虑到环境温度和湿度的影响，从-20℃温度下取出到标准物质的检测应尽快进行。每份样品作为独立检测单元，无需再称量取样，标准物质启封后加入 1 mL 磷酸盐缓冲液复水后充分混匀使用。

3. 使用完后，标准物质的包装瓶需高压灭菌后才能弃掉。

六、 合作者

合作定值单位：中国检验检疫科学研究院、中国科学院武汉病毒研究所、北京市疾病预防控制中心、北京市朝阳区疾病预防控制中心、山东省医疗器械产品质量检验中心、北京市理化分析测试中心、北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

七、 参考文献

[1] 刘思章, 隋志伟, 张韬, 王晶, 刘晓夏, 王义, 张美萍. 噬菌体ΦX174 标准物质定值方法研究[J]. 计量学报, 2019, 40(03): 511-516.