EGFR（T790M）基因突变循环肿瘤DNA标准物质作为测量标准用于EGFR（T790M）基因突变的定性和定量测量，还可用于EGFR（T790M）突变测量方法的验证和实验室质量控制等。
一、样品制备（此系列有四个号：NIM-RM4043、NIM-RM4044、NIM-RM4045、NIM-RM4046）
本标准物质是通过PCR扩增获得长度为152bp的含有目标突变的基因片段，然后与片段化的野生型基因组核酸按照一定的比例配制、分装。一个包装单元含有100μL×2瓶。
二、溯源性及定值方法
由8家实验室采用数字PCR方法对EGFR（T790M）基因突变标准物质的突变基因拷贝数浓度、野生基因拷贝数浓度和突变基因丰度进行测定，平均值作为标准物质的标准值。本标准物质通过使用满足计量学特性要求的制备方法、测量方法和计量器具，保证其量值溯源性。
三、特性量值及不确定度
|
编 号
|
名 称
|
特性量及单位
|
标准值
|
扩展不确定度(k=2)
|
|
NIM-RM4043-1
|
EGFR(T790M)基因突变循环肿瘤 DNA 标准物质
|
突变基因拷贝数浓度（copy/μL）
|
104
|
15
|
|
野生基因拷贝数浓度（copy/μL）
|
991
|
103
|
|
突变基因丰度（%）
|
9.7
|
1.2
|
|
NIM-RM4043-2
|
EGFR（T790M）基因突变循环肿瘤 DNA 标准物质
|
突变基因拷贝数浓度（copy/μL）
|
128
|
12
|
|
野生基因拷贝数浓度（copy/μL）
|
1014
|
88
|
|
突变基因丰度（%）
|
11.6
|
1.0
|
标准值不确定度由定值方法、均匀性和稳定性等分量组成。
四、均匀性检验及稳定性考察
按照JJF1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》要求，采用数字PCR方法对该标准物质进行均匀性检验研究，最小取样量7μL，结果表明均匀性良好。按照先密后疏的原则采用数字PCR方法对该标准物质进行稳定性考察研究，标准值无方向性变化并通过平均值一致性检验，表明稳定性良好。本标准物质自定值日期起，有效期为3年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1.包装与储存：本标准物质采用0.5mL立式拧口塑料离心管包装，100μL/瓶。建议-70˚C低温长期保存。
2.使用注意事项：使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温后离心再打开瓶盖使用。样品开封后，应尽快恢复密封状态。