人转录组测序内参标准物质可作为测量标准，用于人转录组测序定性及定量领域，对人转录组测序流程进行质量控制和定量结果的校准修正。
一、样品制备
本标准物质是体外转录获得的 51 个转录子 RNA，纯度检测合格后稀释至一定的浓度，并进行混合后分装为 2 套不同量值的混合物 Mix1 和 Mix2，均包含 51 个 RNA。
二、溯源性及定值方法
采用绝对定量方法-同位素稀释质谱法对 51 个转录子 RNA 进行拷贝数浓度测定，并通过重量法计算得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定/校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至 SI 单位摩尔。
三、特性量值及不确定度
|
编号
|
名称
|
内参基因名称
|
Mix1
|
Mix2
|
Mix1/Mix2*
|
|
标准值
|
扩展不确定度(k=2)
|
标准值
|
扩展不确定度(k=2)
|
信息值
|
扩展不确定度(k=2)
|
|
(copies/μL)
|
(copies/μL)
|
(copies/μL)
|
(copies/μL)
|
|
NIM-RM4623
|
人转录组测序内参标准物质
|
R1-ALK
|
1.47×106
|
0.21×106
|
5.95×106
|
0.83×106
|
0.25
|
0.05
|
|
R2-ETV6-JAK2
|
1.28×107
|
0.19×107
|
5.20×107
|
0.78×107
|
0.25
|
0.05
|
|
R3-TPM3-NTRK1
|
1.11×107
|
0.16×107
|
1.08×107
|
0.15×107
|
1.03
|
0.2
|
|
R4-EML4-ALK
|
1.19×107
|
0.17×107
|
2.34×107
|
0.33×107
|
0.51
|
0.1
|
|
R5-BICC1
|
7.24×108
|
1.01×108
|
1.44×109
|
0.20×109
|
0.5
|
0.1
|
|
R6-FGFR2-BICC1
|
8.04×104
|
1.13×104
|
1.63×105
|
0.25×105
|
0.49
|
0.1
|
|
R7-FGFR3-TACC3
|
2.38×107
|
0.36×107
|
1.24×107
|
0.19×107
|
1.91
|
0.41
|
|
R8-ETV6
|
1.93×105
|
0.27×105
|
1.00×105
|
0.14×105
|
1.93
|
0.37
|
|
R9-JAK2
|
2.08×108
|
0.31×108
|
1.02×108
|
0.15×108
|
2.03
|
0.43
|
|
R10-LMNA-NTRK1
|
1.07×105
|
0.15×105
|
2.91×104
|
0.41×104
|
3.65
|
0.73
|
|
R11-ROS1
|
6.75×108
|
1.01×108
|
2.68×109
|
0.40×109
|
0.25
|
0.05
|
|
R12-CD74
|
9.54×106
|
1.34×106
|
1.89×107
|
0.28×107
|
0.5
|
0.1
|
|
R13-KIF5B-RET
|
6.89×107
|
1.03×107
|
1.37×108
|
0.22×108
|
0.5
|
0.11
|
|
R14-CCDC6
|
1.32×109
|
0.19×109
|
5.34×109
|
0.75×109
|
0.25
|
0.05
|
|
R15-SLC34A2-ROS1
|
2.15×108
|
0.32×108
|
5.40×107
|
0.81×107
|
3.98
|
0.84
|
|
R16-EML4-NTRK3
|
5.54×105
|
0.78×105
|
2.90×105
|
0.41×105
|
1.91
|
0.38
|
|
R17-PDGFRB
|
1.95×105
|
0.27×105
|
5.08×104
|
0.71×104
|
3.83
|
0.73
|
|
R18-EML4
|
1.12×108
|
0.17×108
|
5.59×107
|
0.84×107
|
2.01
|
0.44
|
|
R19-KIF5B
|
3.20×107
|
0.49×107
|
1.27×108
|
0.18×108
|
0.25
|
0.05
|
|
R20-RET
|
3.88×106
|
0.54×106
|
3.88×106
|
0.54×106
|
1
|
0.19
|
|
R21-PRCC
|
6.10×108
|
0.85×108
|
1.19×109
|
0.18×109
|
0.51
|
0.1
|
|
R22-TPM3
|
1.91×109
|
0.27×109
|
9.48×108
|
1.33×108
|
2.01
|
0.38
|
|
R23-BCAN
|
5.78×104
|
0.81×104
|
2.32×105
|
0.33×105
|
0.25
|
0.05
|
|
R24-BCAN-NTRK1
|
1.25×105
|
0.18×105
|
2.54×105
|
0.36×105
|
0.49
|
0.09
|
|
R25-BCL2L14
|
7.01×108
|
0.98×108
|
6.78×108
|
0.95×108
|
1.03
|
0.2
|
|
R26-BCL2L14-ETV6
|
1.69×107
|
0.24×107
|
1.59×107
|
0.24×107
|
1.06
|
0.21
|
|
R27-RAD51AP1
|
1.17×108
|
0.16×108
|
2.31×108
|
0.32×108
|
0.51
|
0.1
|
|
R28-RAD51AP1-DYRK4
|
1.84×108
|
0.26×108
|
4.75×107
|
0.67×107
|
3.87
|
0.78
|
|
R29-RUNX1
|
1.24×105
|
0.18×105
|
5.91×104
|
0.83×104
|
2.1
|
0.42
|
|
R30-RUNX1-RUNX1T1
|
3.03×105
|
0.42×105
|
1.21×106
|
0.17×106
|
0.25
|
0.05
|
|
R31-STRN
|
1.31×108
|
0.18×108
|
1.27×108
|
0.18×108
|
1.03
|
0.2
|
|
R32-STRN-ALK
|
1.87×106
|
0.26×106
|
4.85×105
|
0.68×105
|
3.87
|
0.78
|
|
R33-FGFR2
|
2.43×107
|
0.34×107
|
1.02×108
|
0.15×108
|
0.24
|
0.05
|
|
R34-FGFR3
|
3.42×107
|
0.48×107
|
9.26×106
|
1.30×106
|
3.71
|
0.74
|
|
R35-TACC3
|
9.54×107
|
1.34×107
|
4.73×107
|
0.66×107
|
2.02
|
0.4
|
|
R36-NTRK1
|
1.88×108
|
0.26×108
|
4.78×107
|
0.67×107
|
3.95
|
0.79
|
|
R37-LMNA
|
2.47×108
|
0.37×108
|
9.80×108
|
1.47×108
|
0.25
|
0.05
|
|
R38-CD74-ROS1
|
2.43×109
|
0.37×109
|
6.14×108
|
0.92×108
|
3.95
|
0.83
|
|
R39-EZR
|
2.22×106
|
0.33×106
|
9.00×106
|
1.35×106
|
0.25
|
0.05
|
|
R40-EZR-ROS1
|
6.87×109
|
1.03×109
|
7.04×109
|
1.13×109
|
0.97
|
0.21
|
|
R41-SLC34A2
|
3.07×106
|
0.43×106
|
5.37×106
|
0.76×106
|
0.57
|
0.11
|
|
R42-CCDC6-RET
|
1.17×105
|
0.16×105
|
1.15×105
|
0.16×105
|
1.02
|
0.2
|
|
R43-ETV6-PDGFRB
|
8.86×104
|
1.24×104
|
8.69×104
|
1.22×104
|
1.02
|
0.2
|
|
R44-TFE3
|
1.62×107
|
0.24×107
|
4.19×106
|
0.63×106
|
3.87
|
0.81
|
|
R45-ASPSCR1
|
1.68×106
|
0.24×106
|
8.15×105
|
1.14×105
|
2.06
|
0.39
|
|
R46-ASPCR1-TFE3
|
1.47×107
|
0.25×107
|
7.45×106
|
1.27×106
|
1.98
|
0.46
|
|
R47-PRCC-TFE3
|
1.04×105
|
0.15×105
|
4.15×105
|
0.58×105
|
0.25
|
0.05
|
|
R48-NTRK3
|
1.04×106
|
0.15×106
|
1.02×106
|
0.15×106
|
1.02
|
0.2
|
|
R49-ETV6-NTRK3
|
2.99×108
|
0.45×108
|
2.94×108
|
0.44×108
|
1.02
|
0.21
|
|
R50-DYRK4
|
4.34×106
|
0.61×106
|
1.73×107
|
0.24×107
|
0.25
|
0.05
|
|
R51-RUNX1T1
|
8.57×105
|
1.20×105
|
2.30×105
|
0.32×105
|
3.74
|
0.71
|
内参基因名称以 RNA 内参的编号-对应的人源基因（含融合基因）名称表示，所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性以及稳定性引入的不确定度分量合成得到。*内参基因拷贝数浓度比值Mix1/Mix2 为信息值，其不确定度为 Mix1 和 Mix2 不确定度平方和的算术平方根。
四、均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性研究，结果表明均匀性良好，最小取样量为 4 μL。采用数字 PCR 方法对该标准物质进行了初步 稳定性研究，参考同类标准物质的稳定性数据，自定值日期起，有效期暂定为 12 个月，研制单位将 继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1. 包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 带内盖彩色冻存管包装，一套包括 Mix1 和 Mix2 共 2 管，每管 10 μL。
2.保存及运输条件：置于-70℃及以下冰箱中保存。采用干冰运输，收到后应检查是否处于冰冻 状态，检查无误才可用于实验。
3.本标准物质开瓶后不建议反复冻融，使用时从冰箱内取出，平衡至室温并混匀后尽快用于建 库，适用于链特异性建库。Mix1 和 Mix2 可分别与两个不同待测样本进行混合，推荐用量为每 μg 人总RNA 中加入 1 μL Mix1 或 Mix2。
4.使用本标准物质进行测量时，请仔细核实内参基因名称，尤其是利用特定内参进行基因表达 量校正时，被校正基因应与内参基因匹配。内参基因序列及其与人基因组整合后的参考基因组序列及注释文件可根据用户需要免费提供。
5.本标准物质相关实验操作，须在生物安全（BSL）一级及以上实验室，佩戴乳胶手套和防护 口罩，在生物安全柜中进行。