本标准物质作为测量标准，用于多基因多位点循环肿瘤 DNA 基因突变检测方法验证，检测产品开发、验证与评价，及检测实验室质量控制等领域。
一、 样品制备
本标准物质通过酶切方法获得长度 167 bp 左右来源于不同基因突变肿瘤细胞系的 DNA 片段，将突变型 DNA 片段按不同比例混合配制而成。
二、 溯源性及定值方法
本标准物质采用数字 PCR 方法测定野生型及突变型基因拷贝数，计算得到基因突变丰度作为标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定/校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）。
三、 特性量值及不确定度（相关产品见列表）
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编号
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名称
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突变位点
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Cosmic ID
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突变丰度（%）
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扩展不确定度(k=2)(%)
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NIM-RM4644
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KRAS (G12A/G12D/G12C/G12V)、PIK3CA (E545K)、EGFR (L858R/T790M/19DEL)、BRAF (V600E)、TP53 (R273H/R273C/R248L)基因突变循环肿瘤DNA标准物质（水平一）
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KRAS G12A
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COSM522
|
2.7
|
0.4
|
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KRAS G12D
|
COSM521
|
3.1
|
0.7
|
|
KRAS G12C
|
COSM516
|
8.5
|
1.2
|
|
KRAS G12V
|
COSM520
|
21
|
3
|
|
PIK3CA E545K
|
COSM763
|
4.1
|
0.8
|
|
EGFR L858R
|
COSM6224
|
1.0
|
0.3
|
|
EGFR T790M
|
COSM6240
|
1.7
|
0.3
|
|
EGFR 19DEL
|
COSM6223
|
8.7
|
1.2
|
|
BRAF V600E
|
COSM476
|
7.0
|
0.8
|
|
TP53 R273H
|
COSM10660
|
36
|
4
|
|
TP53 R273C
|
COSM10659
|
3.4
|
0.7
|
|
TP53 R248L
|
COSM6549
|
8.2
|
1.2
|
|
编号
|
名称
|
突变位点
|
Cosmic ID
|
突变丰度（%）
|
扩展不确定度(k=2)(%)
|
|
NIM-RM4645
|
KRAS (G12A/G12D/G12C/G12V)、PIK3CA (E545K)、EGFR (L858R/T790M/19DEL)、BRAF (V600E)、TP53 (R273H/R273C/R248L)基因突变循环肿瘤DNA标准物质（水平二）
|
KRAS G12A
|
COSM522
|
1.0
|
0.3
|
|
KRAS G12D
|
COSM521
|
1.2
|
0.4
|
|
KRAS G12C
|
COSM516
|
3.7
|
0.8
|
|
KRAS G12V
|
COSM520
|
9.2
|
1.7
|
|
PIK3CA E545K
|
COSM763
|
1.5
|
0.5
|
|
EGFR L858R
|
COSM6224
|
0.7
|
0.17
|
|
EGFR T790M
|
COSM6240
|
1.2
|
0.4
|
|
EGFR 19DEL
|
COSM6223
|
5.9
|
1.4
|
|
BRAF V600E
|
COSM476
|
2.9
|
0.6
|
|
TP53 R273H
|
COSM10660
|
13
|
2
|
|
TP53 R273C
|
COSM10659
|
1.2
|
0.4
|
|
TP53 R248L
|
COSM6549
|
3.1
|
0.6
|
|
编号
|
名称
|
突变位点
|
Cosmic ID
|
突变丰度（%）
|
扩展不确定度(k=2)(%)
|
|
NIM-RM4646
|
KRAS (G12A/G12D/G12C/G12V)、PIK3CA (E545K)、EGFR (L858R/T790M/19DEL)、BRAF (V600E)、TP53 (R273H/R273C/R248L)基因突变循环肿瘤DNA标准物质（水平三）
|
KRAS G12A
|
COSM522
|
0.6
|
0.16
|
|
KRAS G12D
|
COSM521
|
0.55
|
0.18
|
|
KRAS G12C
|
COSM516
|
1.6
|
0.4
|
|
KRAS G12V
|
COSM520
|
4.0
|
0.9
|
|
PIK3CA E545K
|
COSM763
|
0.55
|
0.16
|
|
EGFR L858R
|
COSM6224
|
0.33
|
0.12
|
|
EGFR T790M
|
COSM6240
|
0.54
|
0.18
|
|
EGFR 19DEL
|
COSM6223
|
2.7
|
1.8
|
|
BRAF V600E
|
COSM476
|
1.2
|
0.4
|
|
TP53 R273H
|
COSM10660
|
4.7
|
1.1
|
|
TP53 R273C
|
COSM10659
|
0.5
|
0.2
|
|
TP53 R248L
|
COSM6549
|
1.1
|
0.3
|
所赋特性量值的不确定度由定值、均匀性、稳定性引入的不确定度分量合成得到。
四、 均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 指南 35），采用数字 PCR 法对该标准物质进行均匀性研究，结果表明均匀性良好，最小取样量为 5 μL。采用数字 PCR 法对该标准物质进行了稳定性研究，自定值日期起，有效期暂定为 18 个月，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、 包装、贮存及使用
1. 包装规格：本标准物质为溶液形式，采用 0.5 mL 冻存管包装，每管 50 μL。
2. 保存及运输条件：置于-70°C 以下冰箱中保存，采用冰袋运输。
3. 使用前先从冰箱取出，平衡至室温并混匀后使用。