EGFR 基因突变（T790M 和 L858R）基因组 DNA 标准物质作为测量标准用于 EGFR 基因 T790M和 L858R 突变的定性和定量测量，还可用于 EGFR 基因 T790M 和 L858R 突变测量方法的验证和实验室质量控制等。
一、样品制备
本标准物质是从永生化细胞系 NCI-H1975 中提取、纯化的全基因组核酸，用 TE0.1 buffer（10mM Tris-HCl，0.1mM EDTA，pH=8.0）稀释至一定浓度后进行分装。一个包装单元含有 100 μL 的基因组DNA。
二、溯源性及定值方法
采用被国际检验医学溯源联合委员会（JCTLM）收录的参考测量方法-数字 PCR 方法对 EGFR基因突变（T790M 和 L858R）基因组 DNA 标准物质的突变基因拷贝数浓度、野生基因拷贝数浓度和突变丰度进行测定，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求、经确认的绝对定量测量方法和经检定/校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单
位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及体积的国家法定计量单位升（L）。
三、特性量值及不确定度
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编号
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名称
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突变位点
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特性量值
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标准值
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扩展不确定度（k=2）
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GBW09332
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EGFR基因突变（T790M和L858R）基因组DNA标准物质
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T790M
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突变基因拷贝数浓度（copies/μL）
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2.34×104
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0.21×104
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T790M
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野生基因拷贝数浓度（copies/μL）
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7.8×103
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0.6×103
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T790M
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突变丰度（%）
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75.3
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0.7
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L858R
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突变基因拷贝数浓度（copies/μL）
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2.28×104
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0.17×104
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L858R
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野生基因拷贝数浓度（copies/μL）
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8.0×103
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0.7×103
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L858R
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突变丰度（%）
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74.9
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0.7
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所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。
四、均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 33405），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性研究，结果表明均匀性良好，最小取样量为 5 μL。按照先密后疏的原则采用数字 PCR 方法对该标准物质进行长期稳定性考察研究，标准值无方向性变化并通过平均值一致性检验，表明稳定性良好，并通过运输稳定性研究确定了标准物质的运输条件。本标准物质自定值日期起，有效期为 2 年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1.包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 冻存管包装，每管 100 μL。
2.保存和运输条件：置于-70°C 冰箱中保存，采用冰袋运输。
3.使用注意事项：使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温后，放在金属浴 60°C，600 rpm 孵育 2min，混匀离心再打开瓶盖使用。样品完成取样后，应尽快恢复密封状态。建议冻融次数不超过 20次。