基孔肯雅病毒 nsp1 基因体外转录 RNA 标准物质可作为测量标准，用于基孔肯雅病毒核酸定性和定量测量方法验证、量值溯源以及实验室质量控制。
一、样品制备
本标准物质是通过体外转录获得了基孔肯雅病毒非结构蛋白 nsp1 基因（基因组坐标：77-1981，GenBank No. NC_004162.2）的 RNA 转录子，稀释至一定浓度后进行分装。
二、溯源性及定值方法
采用重量法和逆转录效率修正后的逆转录数字 PCR 方法对 nsp1 基因进行拷贝数浓度测定，得到标准物质的标准值。通过使用满足计量学特性要求绝对定量测量方法和经检定校准的容量计量器具，确保本标准物质的量值溯源至可作为任何一个量制基本单位的实体数基本单位“一”（符号：1）以及质量的国家法定计量单位千克（kg）和浓度的国家法定计量单位摩尔（mol）。
三、特性量值及不确定度
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编号
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名称
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nsp1 基因标准值（copies/μL）
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不确定度（k=2）（copies/μL）
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GBW(E)091402
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基孔肯雅病毒nsp1基因体外转录RNA标准物质
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1.2×10^3
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0.3×10^3
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所赋特性量值的不确定度由定值测量、均匀性和稳定性引入的不确定度分量合成得到。
四、均匀性及稳定性评估
参照 JJF1343 国家计量技术规范（等效 ISO 33405），采用数字 PCR 方法对该标准物质进行均匀性检验，结果表明均匀性良好，最小取样量为 5 μL。本标准物质自定值日期起，有效期暂定为 1 年，研制单位将继续跟踪监测该标准物质的稳定性，有效期内如发现量值变化，将及时通知用户。
五、包装、贮存及使用
1.包装规格：本标准物质采用 0.5 mL 带内盖彩色冻存管包装，每管 50 μL。
2.保存及运输条件：置于-70°c 冰箱中保存。采用干冰运输，收到后应检查是否处于冰冻状态，检查无误才可用于实验。
3.本标准物质开瓶后一次性使用，不可反复冻融。使用前应先从冰箱内取出，平衡至室温并混匀。
4.使用本高浓度标准物质进行梯度稀释时，建议使用 RNA 专用的保存液。
5.由于本标准物质包含了基孔肯雅病毒 nsp1 基因序列片段，请仔细核实使用的 PCR 引物序列所对应的病毒基因组坐标，确保标准物质的量值与其对应。
6.使用本标准物质时如操作不当，可能会导致实验室环境检测阳性。